一、反应物自身因素 不同来源的抗体,反应性各有差异,抗体的浓度、特异性和亲和力都影响抗原抗体反应,为提高试验的**性,应选择高特异性、高亲和力的抗体作为诊断试剂。等价带的宽窄也影响抗原抗体复合物的形成,单克隆抗体不适用于沉淀反应。 抗原的理化性状、分子量、抗原决定簇的种类及数目均可影响反应结果。颗粒性抗原出现凝集反应,可溶性抗原出现沉淀反应,单价抗原与相应抗体结合不出现沉淀现象。 二、环境条件 (一)电解质 抗原与抗体发生结合后,由亲水胶体变为疏水胶体的过程中须有电解 质参与才能进一步使抗原抗体复合物表面失去电荷,水化层破坏,复合物 相互靠拢聚集形成大块的凝集或沉淀。若无电解质参加,则不出现可见 反应。为了促使沉淀物或凝集物的形成,常用 O.85%氯化钠或各种缓冲液 作抗原及抗体的稀释液及反应液。但电解质的浓度不宜过高,否则会出现 盐析现象。 (二)酸碱度 蛋白质具有两性电离性质,因此每种蛋白质都有固定的等电点。抗原抗体 反应必须在合适的 pH 环境中进行,pH 过高或过低都将影响抗原与抗体的理 化性质抗原抗体反应一般在 pH 为 6~9 进行。 (三)温度 抗原抗体反应必须在合适的温度中进行,一般以 15~40℃为宜,最适 反应温度为 37℃。某些特殊的抗原抗体反应,对温度有 一些特殊的要求,例如冷凝集素在 4℃左右与红细胞结合**,20℃以上反 而解离。 此外,适当振荡和搅拌也能促进抗原抗体分子的接触,加速反应,其作用与反应物粒子大小成正比。
抗原与抗体发生特异性结合后,虽由亲水胶体变为疏水胶体,若溶液中无电解质参加,仍不出现可见反应。为了促使沉淀物或凝集物的形成,常用0.85%氯化钠或各种缓冲液作为抗原及抗体的稀释液。影响抗原抗体反应的因素很多,主要有两个方面:一是抗原抗体本身 的因素;另一方面是反应环境因素。